期刊简介
本刊是由广西医科大学主办的国内外公开发行的医学学术期刊。内容丰富，形式多样，科学性强，有实用性。主要设有论著、经验交流、调查研究、技术与方法、护理园地、病例报告等栏目。
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首页>广西医科大学学报杂志
- 杂志名称：广西医科大学学报杂志
- 主管单位：广西医科大学
- 主办单位：广西医科大学
- 国际刊号：1005-930X
- 国内刊号：45-1211/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：全国高校自然科学优秀学报期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中)
拓扑异构酶ⅡαRNA小分子干扰片段表达载体的构建与鉴定
何静；李力；张玮；黎丹戎；王琪；唐步坚
关键词：TopoⅡα基因, RNA干扰, 真核表达, 构建, 卵巢癌, 多药耐药
摘要：目的:构建拓扑异构酶ⅡαRNA小分子干扰片段(TopoⅡαsiRNA)的真核表达载体并进行表达鉴定.方法:(1)根据GeneBank表达序列标签(Esr)数据库设计4对TopoⅡα基因siRNA的小分子片段.(2)采用RT-PCR方法检测细胞中的TopoⅡα表达并确定受试细胞.(3)将佳沉默siRNA片段克隆到psilencer4.1-CMV-neo载体上,质粒DNA直接测序确定克隆成功.(4)采用脂质体法将TopoⅡα-siRNA DNA转染至受试细胞.并采用有限稀释法和G418加压筛选并培养稳转及对照细胞.(5)分别采用RT-PCR和Western blot方法测定稳转及对照细胞系TopoⅡαmRNA和蛋白表达.结果:(1)SKOV3/DDP细胞中TopoⅡαmRNA表达高,与其亲本细胞SKOV3相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)以TopoⅡα-4302siRNA片段沉默TopoⅡαmRNA表达强(P＜0.01).(3)重组阳性克隆经测序鉴定证实TopoⅡα-4302siRNA克隆成功.(4)RT-PCR和Western blot检测结果显示转染TopoⅡα-4302siRNA质粒DNA后能抑制SKOV3/DDP细胞中的TopoⅡα基因表达.结论:成功构建psilencer4.1-CMV-neo-TopoⅡα-siRNA重组表达载体并稳转至SKOV3/DDP细胞系.为下一步探讨TopoⅡα基因在卵巢癌多药耐药中的作用提供了实验基础.
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