期刊简介
本刊是由广西医科大学主办的国内外公开发行的医学学术期刊。内容丰富，形式多样，科学性强，有实用性。主要设有论著、经验交流、调查研究、技术与方法、护理园地、病例报告等栏目。
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首页>广西医科大学学报杂志
- 杂志名称：广西医科大学学报杂志
- 主管单位：广西医科大学
- 主办单位：广西医科大学
- 国际刊号：1005-930X
- 国内刊号：45-1211/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：全国高校自然科学优秀学报期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中)
携带k-ras和c-Myc基因逆转录病毒载体的构建及其转导正常卵巢细胞效能的研究
谭媛；姚德生；李力
关键词：K-ras基因, c-myc基因, 逆转录病毒载体, MOSE, 转导
摘要：目的:构建携带k-ras和c-Myc基因的逆转录病毒载体,研究其转导正常小鼠卵巢上皮细胞 (mouse ovarian surface epithelial cell,MOSE)的效能.方法:用基因克隆的方法将k-ras和c-Myc基因插入到载体pLPCX和pLHCX中,构建真核表达质粒pLPC-mMyc和pLHC-kras.将pLPC-mMyc或pLHC-kRas通过脂质体法转导包装细胞Ecotropic Pheonix细胞,提取含有携带目的基因的重组病毒上清,转染MOSE,获取携带c-Myc和k-ras基因的MOSE细胞株,分别命名为MOSE-Myc细胞和MOSE-Ras细胞,同时拮抗Puromycin和Hygromycin的MOSE细胞株,命名MOSE-RM细胞.用RT-PCR和Western blot检测目的癌基因和蛋白质在MOSE细胞的表达.将MOSE、MOSE-Myc、MOSE-Ras、MOSE-RM被分别注射到CD1裸鼠腹腔,60 d后处死所有裸鼠,解剖检查,观察成瘤情况和生存时间,并进行免疫组织化学染色.结果:RT-PCR能检测到目的基因c-Myc(943 bp)和k-ras(620 bp)mRNA特异的条带,Western blot在转基因细胞株中能检测到c-Myc(67ku)和k-ras (21 ku)基因蛋白质的表达.MOSE-RM和MOSE-Ras组在裸鼠体内均能形成肿瘤,而MOSE和MOSE-Myc在实验结束时均未能形成肿瘤.免疫组织化学染色显示MOSE-Ras和MOSE-RM组k-ras蛋白均呈强阳性,定位于细胞膜;MOSE-RM组c-Myc蛋白呈强阳性,位于细胞核.结论:真核表达质粒pLPC-mMyc和pLHC-kras能够通过逆转录病毒将k-ras和c-Myc高效导入正常小鼠卵巢上皮细胞MOSE,表达目的蛋白.
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