期刊简介
本刊是由广西医科大学主办的国内外公开发行的医学学术期刊。内容丰富，形式多样，科学性强，有实用性。主要设有论著、经验交流、调查研究、技术与方法、护理园地、病例报告等栏目。
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首页>广西医科大学学报杂志
- 杂志名称：广西医科大学学报杂志
- 主管单位：广西医科大学
- 主办单位：广西医科大学
- 国际刊号：1005-930X
- 国内刊号：45-1211/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：全国高校自然科学优秀学报期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中)
BrdU标记胎兔骨髓间充质干细胞及对细胞生物学行为影响的体外研究
李德绘；黎洪棉；梁自乾；柳大烈
关键词：骨髓间充质干细胞, 组织工程, 尿嘧啶核苷酸类, 细胞标记, 细胞毒性
摘要：目的:通过用5-溴脱氧尿苷(5- bromodeoxyuridine,BrdU)标记胎兔骨髓间充质干细胞(bone marrow rnesenchymal stem cells,BMSCs),探讨BrdU作为干细胞标记示踪方法的可行性.方法:取胎兔骨髓组织密度梯度离心法分离培养BMSCs.取P3代细胞以终浓度分别为5,10,15,20 mg/L的BrdU进行标记,分别记为A,B,C,D组；另1孔不含BrdU,作为空白对照(E组).标记12,24,48,72 h后,采用免疫组织化学检测各组细胞阳性率,苔盼蓝排染法细胞计数观察标记后细胞活性.结果:细胞培养观察:原代培养的细胞形态主要为宽大扁平短梭形细胞；传代后细胞形态为长梭形；第3代BMSCs经诱导均能向成骨细胞和脂肪细胞分化.免疫组织化学观察:第3代BMSCs经BrdU标记后,在荧光显微镜下胞核呈绿色荧光.孵育12 h,A,B,C,D组细胞标记阳性率逐渐增高,分别为(33.2±4.3)%、(34.5±3.9)%、(47.9±4.8)%、(52.8±5.1)%,对照组细胞标记阳性率为0,C,D组与A组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);24 h,A,B,C,D组标记率分别为(48.1±4.0)%、(83.4±5.3)%、(91.7±4.9)%、(92.6±4.2)%,对照组细胞标记阳性率为0.48 h和72 h,A,B,C,D,E组标记情况与24 h相似.孵育24,48,72 h,10,15,20mg/L组细胞阳性率与5 mg/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).细胞计数:孵育12h,各组细胞活性均在90%以上,A、B、C、D组与对照组(E)比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；孵育24,48,72 h,各组细胞活性情况与12h情况相似,A,B,C,D组与对照组(E)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).随着标记时间的延长和BrdU剂量的增加,标记率逐渐增高,BrdU终浓度为10 mg/L以上,且标记48 h后细胞标记率＞90%,活细胞数＞90%.结论:BrdU标记BMSCs的佳时间为48 h,佳浓度为10 mg/L;BrdU对细胞毒性小,标记率及安全性高.
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