期刊简介
本刊是由广西医科大学主办的国内外公开发行的医学学术期刊。内容丰富，形式多样，科学性强，有实用性。主要设有论著、经验交流、调查研究、技术与方法、护理园地、病例报告等栏目。
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首页>广西医科大学学报杂志
- 杂志名称：广西医科大学学报杂志
- 主管单位：广西医科大学
- 主办单位：广西医科大学
- 国际刊号：1005-930X
- 国内刊号：45-1211/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：全国高校自然科学优秀学报期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中)
利用CRISPR/Cas9技术构建ATF4基因敲除的HepG2细胞株
易桥勇；王秋雁；李天宇
关键词：ATF4, CRSPR/Cas9系统, 基因敲除, 肝癌
摘要：目的:运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立ATF4基因敲除的HepG2细胞株.方法:针对ATF4基因作用的功能区域,设计靶向ATF4基因Exon 1(外显子1)和Exon 2(外显子2)的两对gRNA.构建PX459-ATF4-gRNA重组质粒并转化DH5α感受态细胞,筛选出重组子后进行测序,通过测序验证所设计的gRNA的有效性.将PX459-ATF4-gRNA质粒转染到HepG2细胞中,挑选单克隆细胞,提取DNA,进行PCR检测与基因测序,获得敲除ATF4基因的细胞株.通过western blotting检测筛选出来的HepG2细胞ATF4基因的敲除效果.结果:菌落PCR与菌液测序结果显示PX459-ATF4-gRNA载体构建成功;PCR扩增电泳与基因测序检测显示成功构建成了ATF4基因敲除的HepG2细胞;western blotting检测结果显示单克隆2号ATF4蛋白不表达,单克隆3号仍表达ATF4蛋白.结论:成功构建ATF4基因敲除的HepG2细胞,为后续ATF4在肝癌中的作用机制和功能研究奠定基础.
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